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rna干扰后为什么能遗传

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这两个概念从原理到实施的效果都差不多,应该怎样区别呢? , 最近在做RNA干扰,目标基因是11-β HSD1,怎么在NCBI上查到11-β HSD1的mRNA序列?怎么设计siRNA来做RNA干扰沉默该基因呢?谢谢,我是新手,尽量说详细点 ...

为什么sirna干扰我的基因,后gapdh也有变化: 小干扰RNA(Small interfering RNA;siRNA)有时称为短干扰RNA(short interfering RNA)或沉默RNA(silencing RNA),是一个长20到25个核苷酸的双股RNA,在生物学上有许多不同的用途。目前已知siRNA主要参与RNA干扰(RNAi)现象,以带有专一性的方式调节基因的表达。此外,也参与一些与RNAi相关的反应途径,例如抗病毒机制或是染色质结构的改变。不过这些复杂机制的反应途径目前尚未明了。

RNA干扰为什么要加入章鱼碱合成酶基因内含子: 你在哪看到加的

RNA干扰后mRNA表达量会上升吗?: 正常情况是要mRNA表达量下降的,但是如果你这个小RNA设计的不好,那有可能下降的水平有限,再通过定量PCR检测时候几个循环的误差就可以弥补回来下降那些的量了,所以尽量不要用太多的循环跑定量。厚百生物祝您选择适用的培养基,实验顺利!

RNA干扰的原理是什么?最好有原理图?:

您好!(RNA干扰的原理附图有六张,但是这里只能粘贴插入一张图片,你把邮箱给我,我发给你全的原理图)短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference, RNAi)。siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分子,能够以序列同源互补的mRNA为靶目标,降解特定的mRNA。首先外源导入的dsRNA被切割为19~23nt的小分子干扰RNA(siRNA)。Dicer作为特异性RNA酶家族的一个成员,切割dsRNA为19~23nt siRNA,这是一个依赖ATP的耗能过程. 切割后的 siRNA具有3’两个核苷酸TT突出末端。然后siRNA结合到RNA酶复合物上形成RNA诱导的基因沉默复合体(RISC,RNA-induced silencing complex)。该复合体依赖ATP释能而解siRNA双链成单链以激活RISC。活化的RISC通过由siRNA决定的碱基互补配对原理切割具有同源序列的基因转录本,最终导致基因沉默效应。

请问反义核酸与RNA干扰两个概念的不同点在哪里?: 区别挺大。反义RNA是直接将单链的RNA放进细胞与mRNA互补。RNA干扰是将一段双链互补的RNA放进细胞,在细胞中某种蛋白质的作用下降解为单链再与mRNA互补,RNA干扰是线虫等低等生物本身具有的免疫机制,其效率比反义RNA高得多。

怎么在NCBI上查到11-β HSD1的mRNA序列,怎么设计siRNA来做RNA干扰沉默该基因呢?: 很基础的问题啊,在NCBI上search:gene,下面的对话框输入你要找的基因的名称,会出来相关的基因序列,看你要找什么物种的,一般是人和鼠的,如人的后缀是Homo sapiens,鼠的是Mus musculus。点击你要的序列号,会进入这个基因的基本信息,一直往下拉会看到mRNA and Protein(s) ,NM开头的序列号就是其CDNA的序列了。关于SiRNA,需要去网站搜索,如invitrogen,promega,等大型生物网站都有相关的tools给你设计,很方便!http://jura.wi.mit.edu/bioc/siRNAext/siRNA_search.cgi?tasto=10925811,你去试试吧

小干扰RNA的发现:

siRNA最早是由英国的大卫·包孔博(David Baulcombe)团队发现,是植物中的后转录基因沉默(post-transcriptional gene silencing;PTGS)现象的一部分,其研究结果发表于《科学》。2001年,汤玛士·涂许尔(Thomas Tuschl)团队发现合成的siRNA,可诱导哺乳动物体内的RNAi作用,结果发表于《科学》。这项发现引发了利用可控制的RNAi,来进行生物医学研究与药物开发的方法。

如何设计合适检测shrna干扰效率的qpcr引物: 如果反转录体系里面有基因组残留,而且你的引物没有跨内含子,这样的情况下就很容易造成你的Ct偏小(除了cDNA扩增外,基因组的模板也会作为模板进行扩增,导致模板起始量偏高);cDNA逆转后是切除内含子的,而基因组是存在内含子的,如果你的引物设计在了跨两个外显子的区域,则只能扩增cDNA而不扩增基因组。
引物不跨外显子设计也可以,但是必须保证你用的逆转录试剂盒里面的gDNA Wiper 可以完全去除你的基因组,你实验的时候可以做一个NRT的对照看一下有没有基因组污染。我做好几个基因的引物就没有跨外显子设计,用的是R223 HiScript Ⅱ Q RT SuperMix for qPCR(+gDNA Wiper),每次NRT也没有扩增,去除基因组效果不错。

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